miRNA定量PCR

介:microRNA (miRNA) 是一类长度约22 nt的非编码单链RNA,广泛存在于动物、植物中,具有基因表达调控的功能,与生物体的生长、发育、癌症的发生等现象息息相关。

目前通用的miRNA逆转录和定量PCR方法(Stem-Loop茎环法),原理如下:

 

技术优势

(1)       采用miRNA专用提取试剂盒(进口产品)有效从植物、动物中提取miRNA,然后采用茎环法进行逆转录,Taqman探针法进行定量PCR分析,从而提高miRNA检测特异性和灵敏度。

(2)       本公司拥有miRNA定量检测的多种内参,如:U6SNORD48SNORD44等多种Human RatMouse内参,有效的提高了miRNA定量PCR精确性。

客户须知:

miRNA定量PCR

周期

最终提供客户资料

miRNA定量PCR

10-14个工作日(视样品和基因数目而定

详细实验总结报告(包括RT引物、扩增引物序列、microRNA提取、逆转录实验、扩增曲线、标准曲线、样品重复结果、相对表达分析结果,统计分析等)

案例:

1.       对于miRNA家族成员设计不同的茎环逆转录引物,从而提高miRNA检测的特异性。

下面这个实验从hsa-let家族进行设计不同的逆转录引物,而且对定量PCR正向引物进行优化,从而有效区分hsa-let检测的特异性,如下图所示:

2.       血清中miRNA表达分析,从中找到与疾病有关的miRNA分子标志物,以及miRNA转移情况。

血清中miRNA定量一直是目前研究的热点之一,由于血清中杂蛋白较多,miRNA含量较低,众多科研人员或公司很难做好血清miRNA定量分析。下面该实验从正常以及某患者血清中,分离miRNA,从中对hsa-200C-3Phsa-200C-3P以及hsa-145-5P表达水平进行分析,从而分析miRNA表达与肿瘤发生发展的关系。本实验中引入了外参cel-miR-39,准确标准化了血清miRNA提取准确性以及定量数据分析的精确性。

客户提供:

样品类型

组织样本

细胞样品

样品需要量

200 mg

 

5-10×106(相当于六孔板长满后的一个孔细胞量)

取样和保存环境

新鲜;-80℃冻存或存于组织保存液中;物种及基因名称(最好提供NCBI中的基因序列号)

物种及miRNA名称(最好提供miRNA database序列号,其参考网址:http://www.microrna.org/

新鲜;-80℃冻存或存于组织保存液中);物种及基因名称(最好提供NCBI中的基因序列号)

物种及miRNA名称(最好提供miRNA database序列号,其参考网址:http://www.microrna.org/

运输

杭州市内干冰上门取样;

外地客户干冰快递运输;

组织保存液,冰袋运输

杭州市内干冰上门取样;

外地客户干冰快递运输;

 

*(经本公司评估后,实验没有结果,不收取任何费用)

 

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