简 介：实时荧光定量PCR（Real -Time Quantitative PCR，又称qPCR）是分析组织细胞中基因表达差异的最为准确的实验手段和方法。通过SYBR Green I或Taqman探针，实现对DNA或RNA的荧光定量PCR监测, 达到对基因的相对定量、绝对定量和定性分析。

SYBR Green I染料法和Taqman探针法

简 介：

SYBR Green I染料法：该染料是专一和双链DNA分子结合发光的荧光染料，每扩增一次，染料结合一次，检测信号增加一倍；

Taqman探针法：5末端连接荧光基团，3端末端连接猝灭基团，PCR扩增时，两个基团相互分离，荧光基团得以检测。

图：SYBR Green I染料法作用原理

图：Taqman探针法作用原理

技术优势：

◆ 采用进口RNA提取试剂盒（柱提取法），同时采用DNase I上柱液去除残余基因组DNA，

有效提高了RNA纯度和定量的精确性。

◆ 采用优化的高效逆转录体系，有效提高cDNA含量，尤其对特殊结构或高GC序列的逆转

录效果显著。

◆ 采用优化的SYBR Green I qPCR Premix及Taqman qPCR Premix，有效提高扩增效率以及

减少非特异性扩增。

◆  本公司注重对定量PCR引物及探针的设计及优化，尤其是对内参引物的选择和优化，有效提高定量PCR数据的准确性及可靠性。

客户须知：

案 例：

1.       定量PCR每一步做到高标准和高质量

2.       注重定量PCR内参的选择及优化

许多科研人员及公司，随便选择一种内参，根本不考虑内参的稳定与否，就进行qPCR分析研究，往往得出与实际相反的结论。本公司针对每个模式生物，准备了至少5种候选内参基因引物，针对每一个qPCR实验，采用gNorm或Normfinder软件筛选最为稳定的内参引物，从而实现qPCR数据的可靠性和准确性。

3.       善于质粒标准品制备、稀释，用于qPCR绝对定量分析

绝对定量中，最重要的莫过于质粒标准品的制备及优化，许多科研人员或公司简单的构建质粒标准品，然后进行稀释，往往导致标准曲线制备较差。本公司善于选取有效的PCR扩增片段，同时优化合适的qPCR引物，采用有效的对标准品的系列稀释，实现qPCR绝对定量的精确性。